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白便和EHP到底有什么关系？
来源：GAA
作者：LuisFernandoAranguren，Ph.D等
来自拉丁美洲国家的南美白对虾出现白便的症状
白便综合征（WFS）是指在东南亚地区养殖的南美白对虾或斑节对虾的池塘中出现漂浮的白色粪便。该综合征被发现与一些若干问题有关，包括虾生长迟缓、大小差异、投料减少和慢性死亡。
在已报告有白便综合征的国家，也报告了其他影响虾肝胰腺和肠道的病原体，这些病原体包括微孢子虫（EHP），引起急性肝胰腺坏死的副溶血性弧菌（VpAHPND）和由弧菌引起的脓*性肝胰脏坏死（SHPN）。图1显示了报告出现白便综合征和其他肠道疾病的东南亚国家。
图1：东南亚出现肠道类疾病的国家分布
EHP是一种细胞内微孢子虫，在肝胰腺中受影响的小管上皮细胞的细胞质内复制，是一种新兴的病原体，主要影响东南亚几个国家养殖的南美白对虾，包括印度尼西亚、越南、中国、泰国、印度和马来西亚。EHP感染的虾的主要临床症状是生长迟缓，导致大小的变异性增加。在更高级阶段，受EHP感染的虾通常表现出软壳、“嗜睡”，减少采食量和空肠。
一些出版物将白便综合征的原因归因于不同的病因，包括霍乱弧菌、Bacilloplasmasp.和Phascolarctobacteriumsp.。还有人提出EHP不是白便综合征的致病因子。基于与白便综合征相关的这些差异，我们进行了一项系统研究，以确定世界上报告EHP的两个不同地区的白便综合征与肠道病原体（包括EHP）之间的任何潜在关系。
这项工作的第一部分是在一个有EHP和白便综合征历史的亚洲国家进行的。从养成池塘收集样品：一个池塘的虾显示有白便综合征，另一个没有，再通过收集肝胰腺和粪便样品并通过组织学和PCR分析他们之间的关联性。
图2：显示有白便综合征的虾的样品（左上）;观察到胃肠道移出来后有白色的色变（右）；肝胰腺显示出受影响的肝胰管的严重畸形和黑化以及缺乏R细胞（左下）
通过定量PCR（qPCR）分别分析来自每个生长池的虾的肝胰脏组织。图3显示了经历白便综合征与没有白便综合征的池塘动物的EHP负荷结果。循环阈值（Ct）值越低，样本中的EHP负载越高。
图3：显示WFS（N=10）的虾中EHP的实时PCR与不显示WFS症状的虾（N=10）
两组动物之间的EHP拷贝数存在明显差异。白便综合征组的平均拷贝数为每ulDNA4×拷贝，而没有白便综合征的池中每ulDNA1×拷贝，差异超过2个对数。这表明，与没有白便综合征的虾相比，具有白便综合征的虾可能具有更高的EHP传染性。同一虾的粪便上的qPCR检测显示出相似的结果，即：有白便综合征的虾在粪便中的EHP拷贝数高于没有白便综合征的虾。
后来，在同一个EHP流行区，我们确定了具有三种不同历史的池塘样本中的EHP拷贝数：没有白便综合征历史的池塘、显示白便综合征的池塘和有白便综合征历史的池塘。图4显示了来自三个不同池塘的动物的EHP拷贝数。
图4：绿色为源自没有WFS病史的池塘、红色为经历WFS的池塘和橙色为具有WFS病史的池塘的虾肝胰腺组织中的EHP拷贝数
我们再次发现与第一个实验中获得的结果相似的结果。来自经历白便综合征（约1×拷贝）的池塘的虾的EHP拷贝数更高，其次是具有白便综合征历史的池塘（约4×拷贝）和没有白便综合征的池塘。
白便综合征在美洲
在西半球，年我们报告养殖虾中存在EHP和EHP样病原体。受EHP感染的虾表现出与东南亚国家相似的临床症状，包括喂料减少，生长严重迟缓和体重差异。两年后，我们在我们之前报道在拉丁美洲养殖的EHP感染的南美白对虾的地区描述了白便综合征的第一例病例。
图5：拉丁美洲经历白便综合征的南美白对虾中的EHP的确认
SHPN在白便综合征中的作用
在报告有白便综合征的东南亚和拉丁美洲，EHP并不是与白便综合征相关的唯一病原体。H＆E染色分析的虾除了EHP外，还显示了脓*性肝胰脏坏死或SHPN的病变（图6）。
图6：来自经历白便综合征的池塘的南美白对虾（10X）的肝胰腺中，败血症性肝胰腺坏死（SHPN）的病变实例
SHPN是一种主要由弧菌属（Vibriospp.）引起的细菌性疾病，包括致病性还有机会性弧菌属（Vibriospp.）。机会性弧菌总是存在肝胰腺中，然而，当原发性肠道病原体引起肝胰腺病变时，这些机会性弧菌属得到一个入口，以在受影响的肝胰腺定植并引起SHPN。
图7：原发性肠道病原体，机会性弧菌属和可能未知的环境因子的组合可导致EHP流行区域的白便综合征
如图7所示，根据我们的分析，我们发现白便综合征、EHP和SHPN在养成池中存在关联，这表明白便综合征是受肠道病原体和可能未知环境因子（一个或多个）影响的虾的一种可能的生理反应。
西半球养殖虾中白便综合征的发现很重要，因为它可以用作EHP存在的预测因子。此外，它将有助于阐明EHP与白便综合征发生之间的强烈关联。由于早期EHP感染没有明显的临床症状，因此应密切监测该区域内养殖的虾是否存在EHP和白便。
展望
根据我们的研究，白便综合征（WFS）与EHP流行区域的EHP之间存在密切关联。EHP与其他肠道病原体（包括SHPN）和可能的未知因素相结合可引起白便综合征。
在EHP流行地区，显示白便综合征临床症状的虾表明在养成池塘中有非常活跃的EHP感染过程。美洲虾业的白便综合征可能反映了15年前东南亚发生的情况，其中EHP偶尔发生，但现在已成为该地区虾业的主要卫生风险因素之一。必须制定生物安全战略，以尽量减少美洲EHP病原体传播的风险。
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